题目
用紫外线法测定溶液的核酸浓度时,最常用的波长A. 280nmB. 260nmC. 240nmD. 220nmE. 320nm
用紫外线法测定溶液的核酸浓度时,最常用的波长
A. 280nm
B. 260nm
C. 240nm
D. 220nm
E. 320nm
题目解答
答案
B. 260nm
解析
本题考查核酸浓度测定时常用的紫外线波长这一知识点。解题思路是了解核酸分子的结构特点以及不同波长紫外线与核酸的相互作用,从而确定最适合用于测定核酸浓度的波长。
核酸分子中的嘌呤和嘧啶碱基含有共轭双键,能够吸收紫外线。在不同波长下,核酸对紫外线的吸收程度不同。经过大量的实验和研究发现,核酸在260nm波长处有特征性的吸收峰,这是由于碱基的共轭双键在该波长下发生电子跃迁,产生较强的吸收。利用这一特性,在260nm波长下测定溶液的吸光度,就可以根据朗伯 - 比尔定律($A = \varepsilon cl$,其中$A$为吸光度,$\varepsilon$为摩尔吸光系数,$c$为溶液浓度,$l$为光程)来计算核酸的浓度。而其他波长,如280nm主要用于测定蛋白质的浓度,因为蛋白质中的色氨酸、酪氨酸等氨基酸在280nm有吸收;240nm、220nm和320nm都不是核酸吸收紫外线的特征波长,不适合用于核酸浓度的测定。